一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準  GB15979-2002

前  言

本規(guī)范原文強制性

GB15979-1995《一次性使用環(huán)境衛(wèi)生 用具衛(wèi)生標準》自1996年公布至今，使制造業(yè)企業(yè)確立了衛(wèi)生要求和總體目標，管理方法單位 也擁有監(jiān)管檢驗根據(jù)，對促進該領(lǐng)域的身心健康發(fā)展趨勢與環(huán)境衛(wèi)生水準的提升發(fā)揮了主動功效。此外，伴隨著產(chǎn)品品種與資料的發(fā)展趨勢，該規(guī)范有一些地區(qū)必須健全。因而明確提出修訂本規(guī)范。

本標準自執(zhí)行之日起替代GB1579-1995.

本規(guī)范的附則A至附錄G為規(guī)范的附則。

本規(guī)范由我國國家衛(wèi)生部明確提出。

本規(guī)范承擔擬定企業(yè)：上海疾病防治監(jiān)測中心；參與擬定企業(yè)：寶潔（我國）有限責任公司、強生（我國）有限責任公司。

本規(guī)范關(guān)鍵起草人：沈偉、盧敏、楊宏平、縝密、潘希和、劉育京。

我國國家行業(yè)標準

           一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準  GB15979-2002

Hygienic standard for disposable sanitary products    替代GB15979-1995

1、范疇

本標準了一次性使用衛(wèi)生用品的設(shè)備和工作環(huán)境衛(wèi)生標準、消毒殺菌實際效果微生物檢測點評規(guī)范和相對應(yīng)檢測方式，及其原料與商品生產(chǎn)制造、消毒殺菌、存儲、運送全過程衛(wèi)生要求和商品標志規(guī)定。

在本規(guī)范中，一次性使用衛(wèi)生用品就是指：

本規(guī)范應(yīng)用與中國從業(yè)一次性使用衛(wèi)生用品的生產(chǎn)制造與售賣的單位、企業(yè)或本人，也適用經(jīng)銷商進口一次性使用衛(wèi)生用品的單位、企業(yè)或本人。

2、引入規(guī)范

以下規(guī)范所包括的條款，根據(jù)在本規(guī)范中引入而組成為本規(guī)范的條款。本規(guī)范出版發(fā)行時，所顯示版本號均為合理。全部規(guī)范都是會被修定，應(yīng)用本規(guī)范的個方應(yīng)討論應(yīng)用以下規(guī)范最新版的概率。

GB 15981-1995    消毒與滅菌實際效果的評價方法與規(guī)范

3、界定

本規(guī)范使用以下界定。

一次性使用衛(wèi)生用品

應(yīng)用一次后即丟掉的、與身體同時或間接接觸的、并為做到人體系統(tǒng)環(huán)境衛(wèi)生或健康教育（抑菌或抗菌）目地而采用的各種各樣日常日常生活用品，商品特性可以是固態(tài)還可以使液態(tài)。例如，一次性使用手套或護指（包含衛(wèi)生護墊）、尿不濕等糞便衛(wèi)生用品（不包括走穩(wěn)紙巾等洗手間用紙）、安全套等，在本規(guī)范中統(tǒng)稱之為“衛(wèi)生用品”。

4、商品食品衛(wèi)生標準

4.1  外型務(wù)必干凈整潔，合乎該衛(wèi)生用品原有特性，不可有不正常氣味與臟東西。

4.2  不可對肌膚與黏膜造成異常刺激性與人民反映以及他危害功效。

4.3  商品須合乎表1中分子生物學指標值。

表1

4.4  衛(wèi)生濕巾除務(wù)必做到表1中的分子生物學規(guī)范外，對大腸埃希菌和金黃葡萄球菌感染的消滅率須≥90%，如需標出對細菌的功效，還須對白色念珠菌的根除率≥90%，其消菌在棚溫下最少須維持1年。

4.5  抑菌（或抗菌）商品出務(wù)必做到表1中的類似平級商品分子生物學規(guī)范外，對大腸埃希菌和金黃葡萄球菌感染的抗菌率須≥50%（溶出物性）或＞26%（非溶出性），如需標出對細菌的功效， 還須白色念珠菌的抗菌率≥50%（溶出物性）或＞26%（非溶出性），其殺菌作用在棚溫下最少須維持1年。

4.6  一切經(jīng)環(huán)氧乙烷消毒殺菌的日用品在出廠時，環(huán)氧乙烷殘余量務(wù)必≤250ug/g。

5、工作環(huán)境食品衛(wèi)生標準

5.1  安裝與包裝棚空氣中細菌菌落數(shù)量應(yīng)≤2500cfu/m³.

5.2  操作臺表層細菌菌落數(shù)量應(yīng)≤20cfu/cm².

5.3  職工手表層細菌菌落數(shù)量應(yīng)≤300cfu/支手，并不可驗出病原菌。

6、消毒殺菌實際效果微生物檢測點評

6.1  環(huán)氧乙烷消毒殺菌：對枯草桿菌灰黑色變異芽胞（ATCC 9372）的消滅指數(shù)值≥10³.

6.2  電磁波輻射消毒殺菌：對簡短鏈球菌芽胞E6d（ATCC 27142）的消滅指數(shù)值應(yīng)≥10³.

6.3  工作壓力蒸汽消毒：對嗜熱人體脂肪鏈球菌（ATCC 7953）的消滅指數(shù)值應(yīng)≥10³.

7、測試標準

7.1  商品測試標準

7.1.1  商品外型：估測，應(yīng)合乎本規(guī)范3.1的要求。

7.1.2  商品毒理測試標準：見附則A。

7.1.3  商品微生物檢驗方式：見附則B。

7.1.4  商品除菌特性、抗菌特性與穩(wěn)定性測試方式：見附則C。

7.1.5  商品環(huán)氧乙烷殘余量測試標準：見附則D。

7.2  工作環(huán)境取樣與測試標準：見附則E。

7.3  消毒殺菌實際效果微生物檢測評價方法：見附則F。

8、原料衛(wèi)生要求

8.1  原材料應(yīng)無毒性、無害、零污染；原材料包裝應(yīng)清理，清晰說明內(nèi)含物的名字、生產(chǎn)制造企業(yè)、生產(chǎn)制造日期或生產(chǎn)批號；危害環(huán)境衛(wèi)生醫(yī)治的與原材料應(yīng)不外露；有特殊要求的原材料應(yīng)標明儲存情況和保存期。

8.2  對危害商品環(huán)境衛(wèi)生品質(zhì)的原材料應(yīng)該有相對應(yīng)檢測報告或證明文件，必需時要開展微生物菌種監(jiān)管和采取有效對策。

8.3  嚴禁應(yīng)用廢舊的日用品作原材料或半成品加工。

9  工作環(huán)境與全過程衛(wèi)生要求

9.1  生產(chǎn)制造棚周邊環(huán)境應(yīng)干凈整潔，無廢棄物，無蚊、蠅等蟲害蚊蠅滋生。

9.2  生產(chǎn)制造棚應(yīng)該有充足室內(nèi)空間達到生產(chǎn)制造必須，合理布局一定要合乎生產(chǎn)工藝流程規(guī)定，切分有效，人、物分離，商品步驟中無反向與交叉式。原材料進到與制成品出來應(yīng)該有污染治理對策和嚴謹?shù)陌踩僮饕?guī)程，降低工作環(huán)境微生物菌種環(huán)境污染。

9.3  生產(chǎn)制造棚里應(yīng)配備合理的防污、防蛀、防鼠措施，路面、墻壁、設(shè)備工作臺應(yīng)整平、光潔、不起塵、有利于除灰與清理消毒殺菌，有足夠的燈具與室內(nèi)消毒或凈化處理對策，以確保工作環(huán)境達到本規(guī)范第5章的要求。

9.4  配備必不可少的制造和質(zhì)量檢測機器設(shè)備，有完善的制造和質(zhì)量檢測紀錄，進一步確保商品環(huán)境衛(wèi)生品質(zhì)。

9.5  生產(chǎn)過程中用易燃性、易燃易爆物件或造成有害物的，必不可少具有相對應(yīng)安全性防護措施，合乎國家相關(guān) 規(guī)范或要求。

9.6  原材料和制成品應(yīng)單獨堆積，待檢、達標、不過關(guān)原材料和制成品應(yīng)嚴苛分離堆積并設(shè)顯著標示。庫房內(nèi)要干躁、清理、自然通風，設(shè)防蛀、防蠅設(shè)備和墊倉板，合乎商品儲存標準。

9.7  進到生產(chǎn)制造棚要跳槽衣和勞保鞋，戴工帽，直接接觸裸裝商品的工作人員需佩戴口罩，清理和消毒殺菌兩手或戴手套；生產(chǎn)制造棚前應(yīng)相對應(yīng)配有換衣棚、洗手臺、消毒池與緩存棚。

9.8  從業(yè)日用品生產(chǎn)制造的技術(shù)人員應(yīng)維持清潔衛(wèi)生，不可留手指甲，工作中時不能戴飾品，長頭發(fā)應(yīng)卷在工帽內(nèi)。急性腸炎、副傷寒、慢性乙型肝炎、活動性肺結(jié)核、尖銳濕疹、非淋及病毒性或滲出性皮膚疾病病人或醫(yī)院病毒攜帶者不可進行立即與設(shè)備了解的制造主題活動。

9.9  從業(yè)日用品生產(chǎn)制造的技術(shù)人員應(yīng)在入崗前及按時（每一年一次）開展健康體檢與衛(wèi)生保健知識（包含生產(chǎn)制造環(huán)境衛(wèi)生、清潔衛(wèi)生、相關(guān)規(guī)范與標準）學習培訓，錄取者即可入崗。

10、消毒殺菌全過程規(guī)定

10.1  消毒殺菌級商品最后消毒殺菌務(wù)必選用環(huán)氧乙烷、電磁波輻射或工作壓力蒸氣等合理消毒方法。常用消毒機務(wù)必滿足相關(guān)衛(wèi)生管理制度。

10.2  依據(jù)商品衛(wèi)生管理制度、 原始環(huán)境污染菌與消毒殺菌實際效果微生物檢測點評規(guī)范制訂消毒殺菌程序流程、性能參數(shù)、工作規(guī)范，工作經(jīng)驗證后嚴格執(zhí)行即定的消毒殺菌加工工藝實際操作。該消毒殺菌程序流程、性能參數(shù)或危害消毒殺菌功效的原材料或生產(chǎn)工藝流程產(chǎn)生變化后應(yīng)再次認證明確消毒殺菌加工工藝。

10.3  每一次消毒殺菌全過程需要開展相對應(yīng)的加工工藝（物理學）和有機化學顯色劑檢測，每月用對應(yīng)的生物指示劑檢測，僅有當加工工藝檢測、有機化學檢測、微生物檢測做到規(guī)范規(guī)定時，被消毒殺菌物件才可以在出廠。

10.4  商品經(jīng)殺菌處置后，外型與特性應(yīng)與消毒殺菌解決前無顯著看得見的差別。

11、包裝、運送與存儲規(guī)定

11.1  實行日用品運送或存儲的企業(yè)或本人，應(yīng)嚴格執(zhí)行經(jīng)營者給予的運送與存儲規(guī)定開展運送或存儲。

11.2  立即與產(chǎn)品觸碰的包裝材料務(wù)必無毒性、無害、清理，產(chǎn)品的全部包裝材料務(wù)必具備足夠的密封性和堅固性以做到確保產(chǎn)品在正常情況下的運送與貯存標準下不會受到環(huán)境污染的目地。

12、產(chǎn)品標志規(guī)定

12.1  產(chǎn)品標志應(yīng)滿足《我國產(chǎn)品質(zhì)量法》的要求，并在產(chǎn)品包裝上標出實行的衛(wèi)生管理制度號及其生產(chǎn)制造日期和保存期（有效期限）或生產(chǎn)日期和限制應(yīng)用日期。

12.2  消毒殺菌級產(chǎn)品還應(yīng)在市場銷售包裝上標明“消毒殺菌級”字眼及其消毒殺菌日期和有效期限或消毒殺菌生產(chǎn)批號和限制應(yīng)用日期，在運送包裝上標出“消毒殺菌級”字眼及其消毒殺菌企業(yè)與詳細地址、消毒方法、消毒殺菌日期和有效期限或消毒殺菌生產(chǎn)批號和限制應(yīng)用日期。

附  錄 A

（規(guī)范的附則）

產(chǎn)品毒理測試標準

A1  各種產(chǎn)品毒理檢測指標值

當原料、生產(chǎn)工藝流程等產(chǎn)生變化很有可能危害產(chǎn)品毒副作用時，應(yīng)按表A1依據(jù)不一樣產(chǎn)品類型給予合理的（經(jīng)政府部門確認的第三方）制成品毒結(jié)構(gòu)力學檢測報告。

表A1

A2  試驗方法

皮膚刺激試驗、正確引導黏膜刺激試驗和皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗方法按國家衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》（第三版）第一手冊《實驗技術(shù)標準》（1999）中的“消毒液毒理實驗技術(shù)性”中相對應(yīng)的試驗方法開展。

固態(tài)商品的試品制取方法依照A3開展。

注

1、用以皮膚刺激試驗中的空白試驗應(yīng)是：鹽水和斑紙貼。

2、在皮膚變態(tài)反應(yīng)中，致敏物解決和激起解決使用的使用量保持一致。

A3  試品制取

A3.1  皮膚刺激試驗和皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗

以橫斷面方法剪一塊斑貼尺寸的商品。針對干的商品，如尿不濕、女性生理期日用品，用鹽水濕潤后貼住皮膚上，再用斑紙貼遮蓋。

A3.2  正確引導黏膜刺激試驗

A3.2.1  干的商品（如女性生理期日用品）

以橫斷面方法裁取充足量的商品，按1g/10mL的比率添加殺菌鹽水，密封性于提純器皿中拌和后放置37℃±1℃下置放24h。制冷到棚溫，拌和后析抽樣液備檢。

A3.2.2  濕的商品（如衛(wèi)生濕巾）

在開展陰道粘膜刺激試驗的當日，擠壓濕紙巾里的加上液做為試件。

A4  判斷規(guī)范

以國家衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》（第三版）第一手冊《試驗技術(shù)標準》（1999）中“毒理試驗結(jié)果的最后判斷”的相對應(yīng)一部分做為試驗結(jié)果判斷標準。

附則B

（規(guī)范的附則）

商品微生物檢驗方法

B1  商品收集與試品解決

于同一批號的三個運送包裝中最少提取12個最少售賣包裝試品，1/4樣品用以檢驗，1/4試品用以備用，另1/2試品（可就地保存）必需時用以復查。取樣的最少售賣包裝不應(yīng)該有開裂，檢測前不可啟開。

在100級凈化處理標準下用無菌檢測方式開啟用以檢驗的最少3個包裝，從每一個包裝中抽樣，精確稱量10g±1g試品。剪下來后添加到200mL殺菌生理鹽水中，充足攪拌，獲得一個生理鹽水樣液。液態(tài)商品用源液立即做樣液。

如被檢試品帶有很多吸水樹脂原材料而致使不可以吸出足夠樣液時，封閉液量可按每一次50mL增長，直到能吸出足夠檢測用樣液。在預估細菌菌落數(shù)量與細菌菌數(shù)時相對應(yīng)調(diào)節(jié)稀釋液度。

B2  細菌菌落數(shù)量與原始環(huán)境污染菌檢驗方式

本辦法適用商品原始環(huán)境污染菌與細菌菌落數(shù)量（下列通稱為細菌菌落數(shù)量）檢驗。

B2.1  操作流程

待以上生理鹽水 樣液當然地基沉降后取上清液做菌落計數(shù)。共注射5個培養(yǎng)皿，每一個培養(yǎng)皿中添加1mL樣液，隨后用制冷至45℃以內(nèi)的溶化的營養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液15-20mL倒進每一個培養(yǎng)皿內(nèi)混和勻稱。待瓊脂凝結(jié)后旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿置35℃±2℃塑造48h后，測算平板電腦上的菌體數(shù)。

B2.2  結(jié)果匯報

菌體呈塊狀生長發(fā)育的平板電腦不適合選用；記數(shù)符合規(guī)定的板材上的菌體，按式（B1）數(shù)值：

式中：X₁――細菌菌落數(shù)量，cfu/g或cfu/mL；

      A――5塊瓊脂培養(yǎng)液版本上的細菌菌落數(shù)量；

      K――稀釋液度。

當菌體數(shù)在100之內(nèi)，按實了解匯報，超過100時才有二位有效數(shù)字。

假如試品菌數(shù)超出本規(guī)范的要求，按B2.3開展復查和結(jié)果匯報。

B2.3  復查方式

將存留的復查試品依前法進行復測2次，2次結(jié)果均值都做到本規(guī)范的要求，則判斷被檢試品達標；在其中有一切1次結(jié)果平均值超過本標準規(guī)定，則判定被檢樣品不合格。

B3  大腸桿菌檢驗方式

B3.1  操作流程

抽樣液5mL，注射50mL乳清蛋白膽鹽發(fā)醇管，置35℃±2℃塑造24h，如不產(chǎn)酸都不脹氣，則匯報為大腸桿菌呈陰性。

如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則畫線注射伊紅美藍瓊脂平板電腦，置35℃±2℃塑造18-24h，觀查平板電腦上菌體形狀。典型性的大腸菌落為黑紫色或紅紫色，環(huán)形，邊沿齊整，表層光潔潮濕，常具備金屬質(zhì)感，也是有的呈黑紫色，沒有或有點金屬質(zhì)感，或淡粉色，核心較深的菌體。

取疑是菌體1-2個作革蘭氏染色鏡檢查，與此同時注射乳清蛋白發(fā)醇管，置35℃±2℃塑造24h，觀查脹氣狀況。

B3.2  結(jié)果匯報

凡乳清蛋白膽鹽發(fā)醇管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，乳清蛋白發(fā)醇管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，在伊紅美藍平板電腦上面有典型性大腸菌落，革蘭氏染色為呈陰性無芽孢桿菌，可匯報被檢樣品驗出大腸埃希菌。

B4  銅綠假單胞菌檢驗方式

B4.1  操作流程

抽樣液5mL，添加到50mL SCDLP栽培基質(zhì)中，充足攪拌，置35℃±2℃塑造18-24h。若有銅綠假單胞菌生長發(fā)育，栽培基質(zhì)表層展現(xiàn)一層薄菌膜，栽培基質(zhì)常呈淺綠色或深藍色。從栽培基質(zhì)的薄菌膜處挑菌塑造物，畫線注射十六烷三丙基溴化銨瓊脂平板電腦，置35℃±2℃塑造18-24h，觀查菌體特點。銅綠假單胞菌在這里培養(yǎng)液上生長發(fā)育優(yōu)良，菌體平扁，邊沿不齊，菌體周邊培養(yǎng)液有點淡粉色，別的菌不久。

取異常菌體玻片作革蘭氏染色，鏡檢查為革蘭氏陰性菌者應(yīng)開展以下實驗。

氧化酶試驗：取一小塊清潔的乳白色過濾紙片放到殺菌培養(yǎng)皿內(nèi)，用無菌檢測玻棒挑菌異常菌體涂在過濾紙上面，隨后在其上滴入一滴新配置的1%二甲基對苯二胺標準溶液，30s內(nèi)發(fā)生粉色或暗紫色，為氧化酶實驗呈陽性，不掉色者為呈陰性。

綠膿菌素實驗：取2-3個異常菌體，各自注射在綠膿菌素測量用培養(yǎng)液斜坡，35℃±2℃塑造24h，添加三氯甲烷3-5mL，充足震蕩使塑造物中也許具有的綠膿菌素融解，待三氯甲烷呈深藍色時，用塑料吸管移到另一試管嬰兒中并添加1mol/L的硫酸1mL，震蕩后靜置一會兒。如頂層發(fā)生粉色或暗紫色即是呈陽性，表明有綠膿菌素存有。

附錄C

（規(guī)范的附錄）

商品除菌性能、抗菌性能與穩(wěn)定性測試方式

C1  試品收集

為使試品具備較好的象征性，應(yīng)當同一批號三個運送包裝中最少隨機抽取20件最小售賣包裝試品，在其中5件備用，5件做抗菌或除菌性能檢測，10件做穩(wěn)定性測試。

C2  實驗菌與菌液制取

C2.1  實驗菌

C2.1.1  病菌：橙黃色金黃葡萄球菌（ATCC 6538），大腸埃希菌（8099或ATCC 25922）。

C2.1.2  酵母：白色念珠菌（ATCC 10231）

菌液制?。喝【N第3-14代的營養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液斜坡新鮮塑造物（18-24h），用5mL 0.03mol/L磷酸鹽緩沖液（一下通稱PBS）洗下菌苔，使菌飄浮勻稱后用以上PBS稀釋液至所需濃度值。

C3  除菌性能實驗方式

該實驗抽樣位置，依據(jù)被試商品經(jīng)營者的表明而明確。

C3.1  還原劑評定實驗

開展除菌性能檢測務(wù)必根據(jù)下列還原劑評定實驗。

C3.1.1  試驗分類

    1）染菌樣照 5mL PBS

2）染菌樣照 5mL 還原劑

3）染菌對相片 5mL 中和劑

4）樣片 5mL 中和劑 染菌對照片

5）染菌對照片 5mL PBS

6）同批號PBS

7）同批次中和劑

8）同批號培養(yǎng)基

C3.1.2  點評要求

1）第1組無實驗菌，或僅有極個別實驗菌菌體生長發(fā)育。

2）第2組有較第1組為多，但較第3、4、5組為少的實驗菌體生長發(fā)育，并符合規(guī)定。

3）第3、4、5組有類似量實驗菌生長發(fā)育，并在1*10⁴-9*10⁴cfu/片中間，其小組之間菌體數(shù)誤差值應(yīng)不超過15%。

4）第6-8組無菌檢測生長發(fā)育。

5）持續(xù)3次實驗獲得達標點評。

C3.2  除菌實驗

C3.2.1  操作流程

將實驗菌24h斜坡塑造物用PBS洗下，做成菌懸液（規(guī)定的含量為：用100uL滴于對比樣片上，回收利用菌數(shù)為1*10⁴-9*10⁴cfu/片）。

取被試樣片（2.0cm*3.0cm）和對仍然片（與試樣同質(zhì)性原材料，同樣尺寸，但沒有抗菌劑，且經(jīng)消毒解決）各4片，分為4組置于4個殺菌平皿內(nèi)。

取以上菌懸液，各自在每一個被試樣片和對仍然上面滴入100uL，勻稱施膠，逐漸記時，功效2、5、10、20min，用無菌檢測鑷各自將樣照資金投入含5mL相對應(yīng)還原劑的試管嬰兒內(nèi)，充足攪拌，作適度稀釋液，隨后取在其中2-3個稀釋液度，各自汲取0.5mL，置于2個平皿，用涼至40-45℃的營養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液（病菌）或沙氏瓊脂培養(yǎng)液（酵母菌）15mL作竭盡，旋轉(zhuǎn)平皿，使其充足勻稱，瓊脂凝結(jié)后旋轉(zhuǎn)平板電腦，35℃±2℃塑造48h（病菌）或72h（酵母菌），干活兒菌菌落計數(shù)。

實驗反復3次，按式（C1）測算除菌率：

           X₃ = （A-B）/A *100%    （C1)

式中：X₃――除菌率，%；

       A――對比試品均值菌體數(shù)；

       B――被使試品均值菌體數(shù)。

C3.2.2 點評規(guī)范

除菌率≥90%，商品有消菌。

C4  溶出物性抗（抑）菌商品抗菌特性實驗方式

C4.1  操作流程

將實驗菌24h斜坡塑造物用PBS洗下，做成菌懸液（規(guī)定的含量為：用100uL滴于對仍然上面或5mL樣液內(nèi)，回收利用菌數(shù)為1*10⁴-9*10⁴cfu/片或mL）。

取被試樣片（2.0cm*3.0cm）或樣液（5mL）和對仍然片或樣液（與試樣同質(zhì)性原材料，同樣尺寸，但沒有抗菌劑，且經(jīng)消毒解決）各4片（置于殺菌平皿內(nèi)）或4管。

取以上菌懸液，各自在每一個被試樣片或樣液和對仍然片或樣液上或內(nèi)滴加100uL，勻稱施膠/混和，逐漸記時，功效2、5、10、20min，用無菌檢測鑷各自將樣照或樣液（0.5mL）資金投入含5mL PBS的試管嬰兒內(nèi)，充足攪拌，作適度稀釋液，隨后取在其中2-3個稀釋液度，各自汲取0.5mL，置于2個平皿，用涼至40-45℃的營養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液（病菌）或沙氏瓊脂培養(yǎng)液（酵母菌）15mL作竭盡，旋轉(zhuǎn)平皿，使其充足勻稱，瓊脂凝結(jié)后旋轉(zhuǎn)平板電腦，35℃±2℃塑造48h（病菌）或72h（酵母菌），干活兒菌菌落計數(shù)。

實驗反復3次，按式（C2）測算抗菌率

          X₄ = ( A-B ) / A * 100    （C2)

式中：X₄――抑菌率，%；

   A――對比試品均值菌體數(shù)；

   B――被試樣品均值菌體數(shù)。

C4.2  點評規(guī)范

抗菌率≥50%-90%，商品有殺菌作用，抗菌率≥90%，商品有較強殺菌作用。

C5  非溶出性抗（抑）菌商品抗菌特性實驗方式

C5.1  操作流程

稱量被試樣片（裁成1.0cm*1.0cm尺寸）0.75g散裝包好。

將0.75g重樣片放進一個250mL的三角燒瓶中，各自添加70mL PBS和5mL菌懸液，使菌懸液在PBS中的含量為1*10⁴-9*10⁴cfu/ mL。

將三角燒瓶固定不動于震蕩搖床邊，以300r/min振搖1h。

取0.5mL振搖后的樣液，或用PBS做適度稀釋液后的樣液，以瓊脂竭盡法注射培養(yǎng)皿，開展菌落計數(shù)。

與此同時設(shè)對比樣片組和不用樣片組，對比樣片組的對照樣片與被試樣片一樣尺寸但沒有抑菌成份，別的操作流程均與被試樣片組同樣，不用樣片組各自取5mL菌懸液和70mL PBS添加一個250mL三角燒瓶中，攪拌，各自于0時間和震蕩1h后，各取0.5mL菌懸液與PBS的溶液做適度稀釋液，隨后開展菌落計數(shù)。

實驗反復3次，按式（C3）測算抗菌率：

     X₅ = （A ? B）/A * 100%       (C3)

式中： X₅――抑菌率，%；

        A――被試樣品震蕩前均值菌體數(shù)；

        B――被試樣品震蕩后均值菌體數(shù)。

C5.2  點評規(guī)范

不用樣片組的菌體數(shù)在1*10⁴-9*10⁴cfu/ mL中間，且試品振蕩前后左右均值菌落數(shù)差值在10%之內(nèi)，實驗合理；被試樣片組抑菌率與對仍然片組抑菌率的差值＞26%，商品具備抗菌功效。

C6  穩(wěn)定性測試方式

C6.1  檢測標準

C6.1.1  當然備用：將原包裝試品置棚溫下最少1年，半年開展抑菌或除菌性能指標。

C6.1.2  加快實驗：將原包裝試品置54-57℃恒溫箱內(nèi)14天或37-40℃恒溫箱內(nèi)3個月，維持空氣濕度＞75%，開展抑菌或除菌性能指標。

C6.2  點評規(guī)范

商品經(jīng)當然備用，其除菌率或抑菌率做到附則C3或附錄C4、附則C5中要求的指標值，商品的除菌或抑菌功效在棚溫下的維持時間即是當然備用時間。

商品經(jīng)54℃加快實驗，其除菌率或抑菌率做到附則C3或附錄C4、附則C5中要求的指標值，商品的除菌或抑菌功效在棚溫下最少維持一年。

商品經(jīng)37℃加快實驗，其除菌率或抑菌率做到附則C3或附錄C4、附則C5中要求的指標值，商品的除菌或抑菌功效在棚溫下最少維持二年。

附則D

（規(guī)范的附則）

商品環(huán)氧乙烷殘余量測試標準

D1  檢測目地

明確商品消毒殺菌后開啟時間，當新品或原料、消毒殺菌加工工藝更改很有可能影響到商品物理化學特性時應(yīng)予以檢測。

D2  試品收集

環(huán)氧乙烷消毒殺菌后，馬上從統(tǒng)一消毒殺菌生產(chǎn)批號的三個紙袋包裝中隨機抽取一定量小袋裝試品，取樣量最少應(yīng)達到要求所需測量頻次的量（留一定量在有必要時開展進行復測用）。

各自于環(huán)氧乙烷消毒殺菌后24h及之后每隔數(shù)日開展殘留量測定，直至殘留量降至本規(guī)范4.6所要求的標準值下列。

D3  儀器設(shè)備與實際操作標準

儀器設(shè)備：氣相色譜、氫焰探測器（FID）

柱：Choromosorb 101 HP60-80目；夾層玻璃柱長2m，Φ3nm。柱溫：120℃.

探測器：150℃。

汽化器：150℃。

載供氣量：氫氣：35mL/min。

         氡氣：35mL/min。

         氣體：350mL/min。

柱前壓約為108kPa。

D4.1  規(guī)范配置

用100mL夾層玻璃針管從純環(huán)氧乙烷小氣瓶中提取環(huán)氧乙烷標準氣體（反復放空自己二次，以清除原來氣體），塞外橡皮頭，用10mL針管提取以上100mL針管中純環(huán)氧乙烷標準氣體10mL，用氫氣稀釋液到100mL（可將10mL標準氣體引入到已經(jīng)有90mL氫氣的帶橡皮塞頭的針管中進行）。用一樣的方式依據(jù)需用再逐步稀釋液2-3次（稀釋1000-10000倍），作三個濃度值的標準氣。按環(huán)氧乙烷小氣瓶中環(huán)氧乙烷的純凈度、稀釋倍數(shù)和棚溫測算出最終標準氣體中的環(huán)氧乙烷濃度值。

計算方法如下所示：

式中：c――標準氣濃度值，ug/mL；

       k――稀釋倍數(shù)；

       t――棚溫，℃。

D4.2  試品解決

最少取2個最小包裝商品，將其剪下來，任意精準稱量2g，放進提純器皿中，添加5mL去離子水，充足混勻，置放4h或震蕩30min備用。如被檢試品為吸水樹脂原材料商品，科適度提升去離子水量，以保證最少可吸出2mL樣液。

D4.3  剖析

待儀器設(shè)備平穩(wěn)后，在相同標準下，環(huán)氧乙烷標準氣各氣相1.0mL，待剖析試品（溶液）各氣相2uL，每一樣液平行面作2次測量。

依據(jù)保存期判定，依據(jù)峰總面積（或基線噪聲）開展定量分析測算，取均值。

D4.4  測算

以所進環(huán)氧乙烷標準氣體的mg（ug）數(shù)對所得的峰總面積（或基線噪聲）作環(huán)氧乙烷工作中曲線圖。

以試品中環(huán)氧乙烷相匹配的峰總面積（或基線噪聲）在工作中曲線圖上求取環(huán)氧乙烷的量A（ug），并且以式（D2）求取商品中環(huán)氧乙烷的殘余量。

式中：X――商品環(huán)氧乙烷殘余量，ug/g；

       A――從工作中曲線圖中常查得環(huán)氧乙烷量，ug；

       M――所取試品量，g；

V_（萃）――提取液容積，mL；

V_（進）――進樣量，mL。

附錄E

（標準的附錄）

生產(chǎn)環(huán)境采樣與測試方法

E1  氣體采樣與測試方法

E1.1  試品收集

在信息下開展。

棚里總面積不超過30m²，在對角里設(shè)里、中、外三點，里、外點部位離墻1m；棚里總面積超出30m²，設(shè)東、西、南、北、中5點，周邊4點距墻1m。

采樣時，將含營養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液的平板電腦（直徑9cm）置采樣點（約桌面上相對高度），開啟培養(yǎng)皿蓋，使平板電腦在空氣中曝露5min。

E1.2  細菌檢查

在采樣前將準備好的營養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液置35℃±2℃塑造24h，取下查驗有零污染，將環(huán)境污染培養(yǎng)液去除。

將已收集的培養(yǎng)液在6h內(nèi)送試驗棚，于35℃±2℃塑造48h觀查結(jié)果，記數(shù)平板電腦上細菌菌落數(shù)。

E1.3  菌體測算

 式中：y₁――空氣中細菌菌落數(shù)量，cfu/m³；

        A――平板電腦上均值細菌菌落數(shù)；

        S₁――平板電腦總面積，cm²；

         t――暴露時間，min。

E2  操作臺表層與職工手表層取樣與測試標準

E2.1  試品收集

操作臺：將經(jīng)殺菌的公稱直徑為5cm*5cm的殺菌規(guī)格型號板放到被檢物件表層，用一浸有殺菌鹽水的棉球在其中擦抹10次，隨后剪去手觸碰一部分棉簽，將棉球放進含10mL殺菌鹽水的取樣管中復檢。

E2.2  病菌菌落總數(shù)檢測

將已收集的樣本在6h內(nèi)送試驗棚，每一個取樣管充足攪拌后取1mL樣液，放進殺菌培養(yǎng)皿內(nèi)，竭盡營養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液，每一個試品平行面注射二塊培養(yǎng)皿，置35℃±2℃塑造48h觀查結(jié)果，記數(shù)平板電腦上細菌菌落數(shù)。

式中：y₂――操作臺表層細菌菌落數(shù)量，cfu/cm²；

       A――平板電腦上均值細菌菌落數(shù)；

      S₂――取樣總面積，cm²；

      y₃――職工手表層細菌菌落數(shù)量，cfu/支手。

E2.3  致病菌檢測

按本規(guī)范附則B開展。

附則F

（規(guī)范的附則）

消毒殺菌實際效果微生物檢測評價方法

F1  環(huán)氧乙烷消毒殺菌

F1.1  環(huán)氧乙烷消毒殺菌實際效果點評用微生物指示菌為枯草桿菌灰黑色變異芽胞（ATCC 9372）。在菌量為5*10⁵-5*10⁶cfu/片、環(huán)氧乙烷濃度值為600mg/L±30mg/L、功效溫度為54℃±2℃、空氣濕度為60%±10%標準下，其消滅90%微生物所需時間D值應(yīng)是2.5-5.8min，生存時間≥7.5min，消滅時間≤58min。

F1.2  每一次檢測最少布線10片生物指示劑，放于較難消滅處。消毒殺菌結(jié)束，取下指示菌片注射鷹眼俠骨頭湯栽培基質(zhì)作判定檢驗或注射營養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液作定量分析檢驗，將沒有處理陽性對照菌片作同樣注射，二者均置35℃±2℃塑造。陽性對照應(yīng)在24h內(nèi)有菌生長發(fā)育。判定塑造試品如持續(xù)觀查7天所有無菌檢測生長發(fā)育，可匯報生物指示劑塑造呈陰性，消毒殺菌達標。定量分析塑造試品與陽性對照對比消滅指數(shù)值做到10³也可匯報消毒殺菌達標。

F2  電磁波輻射消毒殺菌

F2.1  電磁波輻射消毒殺菌實際效果點評 用微生物指示菌為簡短鏈球菌芽胞E601（ATCC 27142），在菌量為5*10⁵-5*10⁶cfu/口腔上皮細胞，其消滅90%微生物所需使用量D₁₀值應(yīng)是1.7kGy。

F2.2  每一次檢測最少選5箱，每件商品布線3片生物指示劑，置最少使用量處。消毒殺菌結(jié)束，取下指示菌片注射營養(yǎng)成分骨頭湯栽培基質(zhì)作判定檢驗或注射營養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液作定量分析檢驗，將沒有處理陽性對照菌片作同樣注射，二者均置35℃±2℃塑造。陽性對照應(yīng)在24h內(nèi)有菌生長發(fā)育。判定塑造試品如持續(xù)觀查7天所有無菌檢測生長發(fā)育，可匯報生物指示劑塑造呈陰性，消毒殺菌達標。定量分析塑造試品與陽性對照對比消滅指數(shù)值做到10³也可匯報消毒殺菌達標。

F3  工作壓力蒸汽消毒

參考GB15981-1995的要求實行。

附則G

（規(guī)范的附則）

培養(yǎng)液與具體制取

G1  營養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)液

成份：

  蛋白胨                            10g

  牛肉膏                             3g

  氧化鈉                             5g

  瓊脂                              15g-20g

  純凈水                            1000mL

制作方法：除瓊脂外別的成份融解于純凈水中，調(diào)pH至7.2-7.4，添加瓊脂，加溫融解，散裝試管嬰兒，121℃殺菌15min儲備用。

G2  乳清蛋白膽鹽發(fā)醇管

成份：

  蛋白胨                            20g

  豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）             5g

  乳清蛋白                              10g

      0.04%溴甲酚紫溶液               25mL

  純凈水                            加至1000mL

制作方法：將蛋白胨、膽鹽及乳清蛋白溶解水里，校準pH至7.4，添加顯色劑，散裝沒管50mL，并放進一個小倒管，115℃殺菌15min，即得。

G3  乳清蛋白發(fā)醇管

成份：

  蛋白胨                            20g

  乳清蛋白                              10g

      0.04%溴甲酚紫溶液               25mL

  純凈水                            加至1000mL

制作方法：將蛋白胨及乳清蛋白溶解水里，校準pH至7.4，添加顯色劑，散裝每管10mL，并放進一個小倒管，115℃殺菌15min，即得。

G4  伊紅美藍瓊脂（EMB）

成份：

  蛋白胨                            10g

  乳清蛋白                              10g

      磷酸氫二鉀                         2g

      瓊脂                              17g

      2%伊紅Y飽和溶液                      20mL

0.65%美藍溶液                     10mL

  純凈水                            加至1000mL

制作方法：將蛋白胨、聚磷酸鹽和瓊脂融解于純凈水中，校準pH至7.1，散裝與圓底燒瓶內(nèi)，121℃殺菌15min預留，臨用時添加乳清蛋白并加溫融化瓊脂，冷至55℃，添加伊紅和美藍飽和溶液混勻，竭盡平板電腦。

G5  SCDLP 液體培養(yǎng)基

成份：

 opo結(jié)構(gòu)脂胨                           17 g

 黃豆蛋白胨                          3 g

 氧化鈉                              5 g

 磷酸氫二鉀                        2.5 g

 葡萄糖水                            2.5 g

大豆卵磷脂                              1 g

 司盤80                              7 g

 純凈水                            1000 mL

制作方法：將各種各樣成份混和(如無opo結(jié)構(gòu)脂胨和黃豆蛋白胨可以用日本多胨替代)，加溫融解，調(diào)pH至7.2～7.3，散裝，121℃殺菌20min，混勻，防止司盤80沉到底端，冷至25℃后應(yīng)用。

G6  十六烷三丙基溴化銨培養(yǎng)液

成份：

牛肉膏                              3 g

  蛋白胨                             10 g

  氧化鈉                              5 g

  十六烷三羥基溴銨                  0.3 g

  瓊脂                               20 g

  純凈水                           1000 mL

制作方法：除瓊脂外，以上各成份混和加溫融解，調(diào)pH至7.4～7.6，隨后添加瓊脂，115℃殺菌20 min，冷至55℃上下竭盡培養(yǎng)皿。

G7  綠膿菌素測量用培養(yǎng)液斜坡

成份：

  蛋白胨                             20 g

  氧化鎂                            1.4 g

  硫酸銨                             10 g

  瓊脂                               18 g

  凡士林(化學純)                       10g

  純凈水                          加至1 000 mL

制作方法：將蛋白胨、氧化鎂和硫酸銨加到純凈水中，加溫融解，調(diào)pH至7.4，添加瓊脂和凡士林，加溫融解，散裝試管嬰兒，115℃殺菌20 min，做成斜坡預留。G8  果膠培養(yǎng)液

成份：

  牛肉膏                              3 g

  蛋白胨                              5 g

  果膠                               120 g

  純凈水                             1 000 mL

制作方法：各成份添加純凈水中泡浸20 min，加溫混合融解，調(diào)pH至7.4，5 mL散裝試管嬰兒中，115℃ 殺菌20 min，站立做成高層住宅預留。

G9  磷酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)液

成份：

  蛋白胨                             10 g

  酵母浸膏                            3 g

  硝酸鉀                              2 g

  亞硝酸鈉                          0.5 g

  純凈水                            1000 mL

制作方法：將蛋白胨與酵母浸膏加到純凈水中，加溫融解，調(diào)pH至7.2，燒開過慮后補充水率，添加硝酸鉀和亞硝酸鈉融解勻稱，散裝到有小倒管的試管嬰兒中，115℃殺菌20 min備用。

G10  血瓊脂培養(yǎng)液

成份：

營養(yǎng)成分瓊脂                           100 mL

  脫纖維羊血(或兔血)                  10 mL

制作方法：將殺菌后的營養(yǎng)成分瓊脂加溫融化，涼至55℃上下，用無菌檢測方式將10 mL脫化學纖維血添加后混勻，竭盡培養(yǎng)皿置電冰箱備用。

G11  甘油果糖發(fā)醇培養(yǎng)液

成份：

  蛋白胨                             10 g

  牛肉膏                              5 g

  氧化鈉                              5 g

  甘油果糖                             10 g

 0.2％溴麝香草酚藍飽和溶液              12 mL

純凈水                            1000 mL

 制作方法：將蛋白胨、氧化鈉、牛肉膏加到純凈水中，加溫融解，調(diào)pH至7.4，添加甘油果糖和溴麝香草酚藍攪拌后，散裝試管嬰兒，115℃殺菌20 min備用。

G12  葡萄糖肉湯

成分：

　蛋白胨                             10 g

  牛肉膏                              5 g

  氧化鈉                              5 g

  葡萄糖                             10 g

純凈水                            1000 mL

制作方法：以上成分溶解純凈水中，調(diào)pH至7.2～7.4，加溫融解，散裝試管嬰兒，121℃殺菌15min儲備用。

G13  兔血液

制作方法：取殺菌3.8％三聚磷酸鈉1份，兔全血4份，攪拌靜放，3 000 r/min離心式5 min，取上清，棄血球。

G14  沙氏瓊脂培養(yǎng)液

  蛋白胨                             10 g

  葡萄糖                             40g

  瓊脂                               20g

純凈水                            1000 mL

用700 mL蒸餾水將瓊脂融解，300 mL純凈水將葡萄糖水與蛋白胨融解，混和以上兩一部分，混勻后散裝，115℃殺菌15 min，即得。應(yīng)用前，用過濾除菌方式添加0.1g/L的氯霉素或是0.03g/L的氨芐青霉素。

判定實驗選用沙氏栽培基質(zhì)，即除不用瓊脂外別的成份與制作方法跟上面一樣。

G15  營養(yǎng)成分骨頭湯栽培基質(zhì)

  蛋白胨                             10 g

  氧化鈉                              5 g

  牛肉膏                              3 g

純凈水                            1000 mL

調(diào)整pH使殺菌后為7.2～7.4，散裝，115℃殺菌30 min，即得。

G16  溴甲酚紫葡萄糖水蛋白胨水培養(yǎng)液

  蛋白胨                             10 g

  葡萄糖水                               5g

純凈水                            1000 mL

調(diào)整pH至7.0～7.2，加2％溴甲酚紫酒精溶液0.6 mL，115℃ 殺菌30 min，即得。

G17  革蘭氏染色液

結(jié)晶紫上色液：

結(jié)晶紫                              1 g

 95％乙酸乙酯                           20 mL

  1％草酸銨溶液                    80 mL

將結(jié)晶紫融解于乙酸乙酯中，隨后與草酸銨飽和溶液混和。

革蘭氏陽性菌碘液：

結(jié)晶紫                              1 g

碘                                  1 g

  碘酸鉀                              2 g

  純凈水                             300 mL

脫色劑

95％乙酸乙酯

復染液：

(1)沙黃復染液：

沙黃                               0.25 g

  95％乙酸乙酯                            10 mL

純凈水                              90 mL

將沙黃融解于乙酸乙酯中，隨后用純凈水稀釋液。

(2)稀石炭酸復紅液

稱量偏堿復紅10g，研細，加95％乙酸乙酯100mL，置放留宿，過濾紙過慮。取該液10mL，加5％石炭酸溶液90mL混和，即是石炭酸復紅液。再取此液10mL，放水90mL，即是稀石炭酸復紅液。

G18  0.03 mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.2）

成份：

磷酸氫二鈉                       2.83 g

  磷酸二氫鉀                       1.36 g

 純凈水                           1000 mL

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